Ubat oligonukleotida telah dibangunkan selama lebih daripada 40 tahun sejak yang pertama dilahirkan pada tahun 1978. Walau bagaimanapun, perkembangannya lebih perlahan daripada jenis ubat lain kerana ketidakstabilan yang wujud dan kecekapan pengambilan selular yang rendah. Kemunculan sistem penyampaian baru dan teknik pengubahsuaian kimia telah banyak memperbaiki masalah ini, dan ubat oligonukleotida telah menunjukkan perkembangan pesat dalam beberapa tahun kebelakangan ini. Pada masa ini, sudah ada garis panduan dan kertas putih industri mengenai penilaian imunogenik ubat antibodi dan biologi lain, tetapi masih terdapat sedikit laporan mengenai imunogenik ubat oligonukleotida dalam haiwan atau pesakit, dan tiada panduan sistematik. Pemahaman terhad tentang imunogenik ubat oligonukleotida juga sangat menyekat pembangunan kelas ubat ini.
Kunci kepada imunogenisiti ubat adalah untuk mempertimbangkan sama ada sistem imun boleh mengiktiraf ubat itu sebagai diri sendiri dan bertolak ansur, dan aspek lain yang mempengaruhi imunogenisiti termasuk laluan pentadbiran dan penyakit khusus yang dirawat (Rajah 1).
Rajah 1 Cara untuk menjejaskan imunogenisitas (Front. Immunol., 18 Ogos 2020 Sec. Vaksin dan Terapi Molekul)
Ciri-ciri ubat: Berbanding dengan kebanyakan biologik biasa (seperti antibodi monoklonal), ubat oligonukleotida adalah agak kecil, mengandungi lebih sedikit epitop berpotensi daripada rakan protein yang lebih besar, jadi ia secara amnya dianggap mempunyai imunogenik yang rendah. Walau bagaimanapun, interaksi antara molekul oligonukleotida dan sistem imun adalah kompleks, dengan potensi untuk mendorong imuniti semula jadi. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa urutan siRNA boleh menjejaskan rangsangan imun melalui reseptor seperti tol (TLR), dan urutan siRNA yang kaya dengan asas guanin dan urasil cenderung untuk menimbulkan lebih banyak aktiviti rangsangan imun. Untuk meningkatkan kestabilan, keselamatan, pengambilan selular dan keberkesanan ubat oligonukleotida, pengubahsuaian kimia biasanya digunakan untuk mereka dalam proses pembangunan ubat oligonukleotida generasi baru. Pengubahsuaian tulang belakang asid nukleik, bahagian glikosil ribosa dan nukleobes telah digunakan secara meluas, dan pengubahsuaian ini berkemungkinan meningkatkan tindak balas imun. Di samping itu, jujukan asid nukleik yang serupa dengan mikroorganisma mungkin juga mempunyai potensi rangsangan imun, jadi jujukan oligonukleotida baru mungkin mempunyai imunogenisitas yang lebih tinggi.
Laluan pentadbiran: Ubat oligonukleotida boleh bertindak melalui pelbagai laluan pentadbiran, seperti suntikan intravena dan tisu, suntikan oral dan subkutan (Rajah 2).
Rajah 2 Laluan ubat oligonukleotida bagi kaedah pentadbiran dan penghantaran (Nat. Nanotechnol. 16, 630–643 (2021).)
Pada masa ini, ubat oligonukleotida yang diluluskan terutamanya bertindak dengan menghantar ke tapak terhad imun, tetapi menghantar ubat oligonukleotida secara berkesan ke pelbagai tisu masih merupakan cabaran utama untuk pembangunan ubat oligonukleotida kerana kesukaran oligonukleotida melalui membran. Pembangunan pembawa penghantaran telah banyak menyelesaikan masalah ini, dan pembawa penghantaran boleh membawa tindak balas imun yang berbeza mengikut dua urutan magnitud dan boleh bertindak melalui pelbagai mekanisme. Pembawa penghantaran yang berbeza menghantar molekul siRNA merentasi membran sel dengan cara yang unik (Rajah 2), mendedahkan siRNA kepada jumlah dan jenis reseptor pengecaman corak (PRR) yang berbeza, menjadikannya lebih mudah terdedah kepada pengecaman imun semula jadi. Di samping itu, kaedah penyampaian biasa semasa konjugasi GalNAc (N-acetylated galactosamine) dan pembawa zarah nano lipid (LNP) adalah terutamanya suntikan intravena dan subkutan, yang mempunyai risiko imunogenisitas yang lebih tinggi. Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, kaedah penyampaian ubat oligonukleotida baharu seperti vesikel endogen, asid nukleik sfera, dan aplikasi nanoteknologi juga sedang berkembang, yang juga akan membawa cabaran baharu kepada ujian imunogenisitas.
Strategi Analisis untuk Imunogenisiti Ubat Oligonukleotida
Memandangkan imunogenisitas sangat berkaitan dengan keberkesanan dan keselamatan ubat, analisis imunogenisitas diperlukan untuk ubat oligonukleotida untuk menyokong perkembangan dan ujian klinikal mereka. Banyak prinsip bioanalitik yang digunakan untuk ubat protein juga boleh digunakan untuk ubat oligonukleotida, terutamanya mengikut strategi analisis imunogenisiti hierarki, tetapi kita juga perlu mempertimbangkan komponen struktur unik ubat oligonukleotida, laluan pentadbiran dan tapak tindakan yang meningkatkan kerumitan tindak balas imun. dan kaedah bioanalisis.
Berdasarkan ciri-ciri ubat oligonukleotida, beberapa perhatian harus diberikan semasa menguji imunogeniknya: 1) Antibodi anti-dadah (ADA) yang mungkin dihasilkan oleh komponen pengubahsuaian dadah, bahan penghantaran dan media penghantaran perlu dinilai sepenuhnya; 2) Ubat oligonukleotida mempunyai pelbagai laluan pentadbiran, kita perlu memberi perhatian kepada pengesanan pelbagai jenis antibodi imunoglobulin dalam pelbagai jenis sampel; 3) Mengikut pengetahuan semasa, berbanding dengan ubat tradisional, tindak balas ADA yang disebabkan oleh ubat oligonukleotida kadang-kadang berkembang dengan perlahan, mungkin selama beberapa bulan. Oleh itu, semasa menjalankan penilaian risiko imunogenisitas pada peringkat awal pembangunan, adalah disyorkan untuk menyimpan sampel pada peringkat ini dan menyiasat imunogeniknya berdasarkan data baharu yang didedahkan di klinik, memberikan maklumat untuk kajian utama dan kemudian.
Untuk menyokong pembangunan dan ujian klinikal ubat siRNA, Pharmaron telah membangunkan kaedah pengesanan untuk ADA yang dihasilkan oleh siRNA, dan mempunyai beberapa pertimbangan dan cadangan dalam proses pembentukan kaedah:
Disebabkan oleh struktur yang berbeza daripada antibodi protein, kaedah pelabelan protein konvensional tidak boleh digunakan untuk pelabelan ubat siRNA, dan kaedah pelabelan baharu yang menggabungkan biotin dan digoxin telah berjaya digunakan;
Disebabkan oleh imunogenisiti siRNA yang lemah, pertalian antibodi kawalan positif yang disediakan adalah lemah. Dengan terus mengoptimumkan langkah pengesanan, kepekaan kaedah telah memenuhi keperluan peraturan semasa.
